化学试剂销售说一说DNA提取的几种方法介绍

2020-11-07  来自: 沈阳萨雷硕化学试剂有限公司 浏览次数:82

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一、化学试剂销售说一说DNA提取的几种方法介绍

浓盐法:

使用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同,将二者别离,常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少数辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除掉蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉积出来。

也可用0.15 MNaCL液重复洗刷细胞破碎液除掉RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除掉蛋白。

两种方法比较,后种方法使核酸降解或许少一些。

以稀盐酸溶液提取DNA 时,参加适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的别离.在提取过程中为抑制安排中的DNase对DNA 的降解效果,在氯化钠溶液中参加柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA。

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阴离子去污剂法: 

用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,能够直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够损坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA。

苯酚抽提法: 

苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解效果.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚类似相溶.蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相.离心分层后取出水层,屡次重复操作,再兼并含DNA 的水相,使用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉积DNA .此时DNA是非常粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出.此法的特点是使提取的DNA坚持状况。

水抽提法: 

使用核酸溶解于水的性质,将安排细胞破碎后,用低盐溶液除掉,然后将沉积溶于水中,使充沛溶解于水中,离心后搜集上清液.在上清中参加固体氯化钠调理至2.6m.参加2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%、80%和95%乙醇以及丙铜洗刷,最终在空气中干燥,既得样品.此法提取的中蛋白质含量较高。

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